
厭氧培養箱是用于培養厭氧微生物的關鍵設備,操作時需嚴格遵守以下注意事項以確保實驗安全和培養效果:
一、操作前準備
1. 檢查氣源
確認氮氣、氫氣、二氧化碳氣瓶壓力充足(通常需≥0.3MPa),氣體純度≥99.99%,避免雜質影響厭氧環境。
檢查氣體管道連接是否密封,無泄漏(可用肥皂水檢測)。
2. 預還原培養基
培養基使用前需煮沸驅氧,并迅速放入厭氧箱內預還原24小時以上(如使用刃天青指示劑,確保無色狀態)。
3. 設備預運行
提前開啟厭氧箱電源,運行至少2小時(或按說明書要求),確保箱內達到厭氧狀態(氧濃度<1ppm,可用氧指示劑驗證)。
二、操作過程注意事項
1. 樣品傳遞規范
使用專用傳遞艙(過渡艙):
先抽真空(至 0.1MPa),再充氮氣(重復2 3次),確保氧氣被置換。
避免頻繁開啟傳遞艙,每次操作后需恢復厭氧環境。
2. 個人防護
佩戴無粉手套(避免粉末污染箱內環境),必要時使用口罩和護目鏡。
操作氣體(如氫氣)時嚴禁明火或靜電。
3. 箱內操作要點
工具和物品需用酒精消毒并晾干后放入,避免帶入氧氣或水分。
動作輕緩,減少氣流擾動,避免手套破損(定期檢查手套密封性)。
培養皿、試管等容器需密封(如使用厭氧袋或膠塞)。
三、使用后維護
1. 清潔與消毒
定期用75%酒精或專用消毒劑擦拭箱體內壁、手套和托盤,防止微生物污染。
廢液、廢培養基需及時移出,避免滋生雜菌。
2. 氣體管理
關閉氣瓶閥門后,需釋放管道殘余壓力(防止逆流)。
長期不用時,每周至少開機運行1次以維持厭氧環境。
3. 催化劑再生
鈀催化劑(除氧劑)每2 3個月于160℃烘烤2小時再生,失效后及時更換。
四、安全警示
1. 氫氣風險
氫氣易r易爆,確保箱體接地良好,操作時遠離火花、高溫設備。
2. 缺氧風險
避免將頭部伸入箱內,防止窒息(箱內為無氧環境)。
3. 應急處理
如遇漏氣或著火,立即關閉氣源,使用二氧化碳滅火器(不可用水或干粉)。
五、常見問題處理
箱內濕度高:添加硅膠干燥劑或開啟除濕功能。
氧濃度升高:檢查手套密封性、傳遞艙操作步驟是否規范,或更換催化劑。
培養污染:排查傳遞艙消毒程序、培養基滅菌是否c底。
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